詳細(xì)內(nèi)容

　　乙酰乙酰輔酶A(Acetoacetyl-CoA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒  BS-0029

　　本試劑盒僅供研究使用。

　　檢測范圍：

　　96T

　　0.3ng/L - 18 ng/L

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測定微生物中乙酰乙酰輔酶 A(Acetoacetyl-CoA)含量。

　　實(shí)驗(yàn)原理

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中乙酰乙酰輔酶 A(Acetoacetyl-CoA)水平。用純化 的乙酰乙酰輔酶 A(Acetoacetyl-CoA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中 依 次 加 入 乙 酰 乙 酰 輔 酶 A(Acetoacetyl-CoA) ， 再 與 HRP 標(biāo) 記 的 乙 酰 乙 酰 輔 酶 A(Acetoacetyl-CoA)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深 淺和樣品中的乙酰乙酰輔酶 A(Acetoacetyl-CoA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸 光度(OD 值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中乙酰乙酰輔酶 A(Acetoacetyl-CoA)濃度。

　　試劑盒組成

　　1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶

　　3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶

　　5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶

　　7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標(biāo)準(zhǔn)品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

　　9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份

　　11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個(gè)

　　標(biāo)本要求

　　1.標(biāo)本處理：(1)水樣 采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過濾后，備查

　　(2)組織

　　樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相 關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)， 可將標(biāo)本放于-20℃保存，備查

　　2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

　　乙酰乙酰輔酶A(Acetoacetyl-CoA)試劑盒操作步驟

　　1. 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、 待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加 50 微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　2. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。

　　4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。

　　6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

　　15 分鐘.7. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　8. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

　　計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實(shí)際濃度。

　　注意事項(xiàng)

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 1 小時(shí)后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4. 請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請(qǐng)避光保存。

　　7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

　　檢測范圍：

　　10 ng/L -500ng/L

　　規(guī)格：

　　96 人份/盒 48人份/盒

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6 個(gè)月

更新時(shí)間：2024/9/18 10:33:25

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