犬糖連抗原153(CA153)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：

96T

0.1U/ml - 5U/ml

使用目的：

本試劑盒用于測定犬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中糖連抗原 153(CA153)含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中犬糖連抗原 153(CA153)水平。用純化的犬糖連抗原 153(CA153)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入糖連抗原 153(CA153)，再與 HRP 標記的糖連抗原 153(CA153)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的糖連抗原 153(CA153)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，通過標準曲線計算樣品中犬糖連抗原153(CA153)濃度。

試劑盒組成

130 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7終止液6ml×1 瓶2

酶標試劑6ml×1 瓶8標準品(8U/ml)0.5ml×1 瓶

3酶標包被板12 孔×8 條9

標準品稀釋液1.5ml×1 瓶

4樣品稀釋液6ml×1 瓶

10說明書1 份5

顯色劑 A 液6ml×1 瓶11

封板膜2 張6

顯色劑 B 液

6ml×1/瓶12

密封袋1 個

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

4U/ml

5 號標準品

150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2U/ml

4 號標準品

150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

1U/ml

3 號標準品

150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

0.5U/ml

2 號標準品

150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

0.25U/ml

1 號標準品

150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 后棄去，如此

重復(fù) 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線，好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

犬糖連抗原153(CA153)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書

保存條件及有效期

1.試劑盒保存：;2-8℃。

2.有效期：6 個月