詳細(xì)內(nèi)容
人 HLA-ABC 抗體酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍：
96T
1 pg/ml -55 pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 HLA-ABC 抗體含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人 HLA-ABC 抗體水平。用純化的抗原包被微孔 板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入 HLA-ABC 抗體，再與 HRP 標(biāo)記的抗原 結(jié)合，形成抗原 - 抗體 - 酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 HLA-ABC 抗體呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（ OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線 計(jì)算樣品中人 HLA-ABC 抗體濃度。
試劑盒組成 1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶
1 ．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于 -20 ℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（ HRP ）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。
48pg/ml
5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
24pg/ml
4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12pg/ml
3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6pg/ml
2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3pg/ml
1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、 待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl ，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl ， 然后再加待測(cè)樣品 10μl （樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37 ℃溫育 3 0 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl ，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3 。
8. 洗滌：操作同 5 。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl ，再加入顯色劑 B50μl ，輕輕震蕩混勻， 37 ℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl ，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零， 450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（ OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
人 HLA-ABC 抗體酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
操作程序總結(jié)： 計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1 ．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2 ．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3 ．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4 ． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n 倍）后再測(cè)定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6 ．底物請(qǐng)避光保存。
7 ．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn) .
8 ．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9 ．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
保存條件及有效期
1 ．試劑盒保存：； 2-8 ℃。
2 ．有效期： 6 個(gè)月
更新時(shí)間：2024/11/12 8:46:41
標(biāo)簽：
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