詳細內(nèi)容
人HLA-DP抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:
96T
5 pg/ml -350 pg/ml
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中 HLA-DP 抗體含量。
實驗原理本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人 HLA-DP 抗體水平。用純化的抗原包被微孔 板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入 HLA-DP 抗體,再與 HRP 標記的抗原結 合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶 的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 HLA-DP 抗體呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中 人 HLA-DP 抗體濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標試劑 6ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶
7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標準品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶
9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份
11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。
320pg/ml
5 號標準品
150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
160pg/ml
4 號標準品
150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
80pg/ml
3 號標準品
150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
40pg/ml
2 號標準品
150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
20pg/ml
1 號標準品
150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 后棄去,如此 重復 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
人HLA-DP抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書 操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間好 控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值 大于標準品孔孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計 算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月
更新時間:2024/12/10 15:38:04
標簽:
HLA-DP抗體 酶聯(lián)免疫分析試劑盒 ELISA試劑盒
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