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　　BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書(微板法 96 樣)

　　一、產(chǎn)品簡介：

　　BCA 蛋白含量試劑盒提供一種簡單，快速，耐去污劑(多 5%)的檢測蛋白質(zhì)濃度 的方法。由于蛋白質(zhì)能將 Cu 2+還原成 Cu +;BCA 可與 Cu +結(jié)合生成紫藍(lán)色復(fù)合物，在 562nm 處有大光吸光值，顏色的深淺與蛋白含量成正比，因此可根據(jù)吸光值測定蛋白質(zhì)濃度。

　　二、試劑盒組分與配制:

　　試劑名稱

　　規(guī)格

　　保存要求

　　備注

　　試劑 A

　　液體 25mL×1 瓶

　　4℃保存

　　依據(jù)實(shí)驗(yàn)用量，臨用試劑

　　A:B=50:1 的比例混勻成反應(yīng) mix

　　試劑 B

　　液體 0.5mL×1 支

　　4℃保存

　　標(biāo)準(zhǔn)品

　　液體 1.5mL×1 支

　　4℃保存

　　若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑

　　三、所需的儀器和用品：

　　酶標(biāo)儀、96 孔板、臺式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、移液器和蒸餾水。

　　四、蛋白含量測定：

　　建議正式實(shí)驗(yàn)選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)!

　　1、樣本制備：

　　(1)組織樣本：

　　稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液(提取液可選用酶提取緩沖液、蒸餾水、生理鹽水) 冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。

　　【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn)，一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測定，如 10 倍。實(shí)

　　驗(yàn)可以先選 2 個樣本測定，摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。 (2)細(xì)菌或細(xì)胞樣本：

　　先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清;取 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液; 超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴，功率 20%或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次)， 12000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。

　　【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗(yàn)，一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進(jìn)行測定，如 10 倍。實(shí) 驗(yàn)可以先選 2 個樣本測定，摸索確定適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù)。

　　(3)液體樣本：澄清無色液體樣品可以直接測定。若渾濁，離心后取上清檢測。

　　2、上機(jī)檢測

　　(1)酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 562 nm。(2)反應(yīng) mix 置于 60℃水浴預(yù)熱 30 min(僅煮一次即可)。

　　試劑名稱(μL)測定管空白管(只做一次)樣本5蒸餾水5反應(yīng) mix200200混勻，于 60℃保溫 30min，全部轉(zhuǎn)移到 96 孔板， 于 562nm 處測定吸光值 A，△A= A 測定-A 空白。

　　【注】：若△A﹥1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測定。本試劑盒僅供科研使用

　　五、結(jié)果計算：

　　1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.188x - 0.0046;x 是標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量(

　　μg)，y 是△A。

　　2、Cpr (mg/g 鮮重)= [(△A+0.0046)÷0.188×10 -3]÷(V1÷V×W) ×D

　　=1.06×(△A+0.0046) ÷W×D

　　3、Cpr (mg/mL)=[ (△A+0.0046)÷0.188×10 -3]÷V1×D=1.06×(△A+0.0046)×D

　　4、Cpr (μg/10 4 cell))=[ (△A+0.0006)÷0.0687]÷(V1÷V×500)×D=2.13×(△A+0.0006)×D

　　V－－－－提取液體積：1mL;

　　V1－－－－加入粗提液體積：0.005mL;

　　W－－－－樣本質(zhì)量：g;

　　D－－－－稀釋倍數(shù);

　　500－－-細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

　　附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程：

　　1 標(biāo)準(zhǔn)品母液(500μg/mL)。

　　2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0,100, 200, 300, 400, 500. μg/mL。也可根據(jù)實(shí) 際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。

　　3 依據(jù)測定管加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。