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　　免疫熒光染色|七色多重?zé)晒馊旧�試劑�?(六標(biāo)七色)

　　原理介紹:酪酰胺信號放大(TSA，Tyramidesignalamplification)技術(shù)是一類利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白進(jìn)行標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法，類似常規(guī)免疫組化的DAB顯色方法，TSA技術(shù)同樣采用HRP標(biāo)記的二抗，同樣有對應(yīng)的“顯色”步驟(HRP催化加入反應(yīng)體系的酪胺熒光素底物，產(chǎn)生活化熒光底物，活化底物可與抗原上的酪氨酸等殘基共價結(jié)合，使樣品上穩(wěn)定的共價結(jié)合酪胺熒光素。之后用熱修復(fù)法洗去非共價結(jié)合的一抗-二抗-HRP復(fù)合物，重復(fù)下一種一抗-hrp二抗來第二輪孵育，換另一種酪胺熒光素底物，如此往復(fù)就可實現(xiàn)多重標(biāo)記。

　　TSA詳細(xì)原理是利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(yīng)(酪胺鹽在HRP催化H202下形成共價鍵結(jié)合位點)，產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物，該產(chǎn)物能與周圍的蛋白殘基(包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結(jié)合，這樣在抗原-抗體結(jié)合部位就有大量的熒光素沉積，結(jié)果使其檢測信號得到10-100倍增強。簡單來說，用這種方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的HRP(而不是直接偶聯(lián)熒光素)，來催化后續(xù)添加入體系的非活性熒光素。

　　熒光素在HRP和過氧化氫的作用下被活化，跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價偶聯(lián)，使得蛋白樣品與熒光素穩(wěn)定結(jié)合。然后微波或煮沸或者水浴等熱修復(fù)處理，一輪非共價結(jié)合的抗體被洗掉，共價結(jié)合的熒光素穩(wěn)定共價結(jié)合在樣本切片蛋白上。再換個一抗來第二輪孵育，周而復(fù)始。等到所有抗體孵育結(jié)束，熒光素都結(jié)合好后，后去檢測結(jié)果。由于每次體系中都只有單一抗體孵育，因此無需擔(dān)心抗體交叉反應(yīng)，以及一抗二抗種屬匹配問題，大大減少了實驗設(shè)計時不同種屬抗體選擇匹配的限制。也就是說，如果用TSA技術(shù)，同一張片子上所有的靶標(biāo)都可以選用特異性高的兔單克隆抗體。搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以進(jìn)行實驗，而且信號放大的倍數(shù)大大增強。本公司開發(fā)的試劑盒具體酪胺熒光染料為以下其中一種或者多種：480，520，570，620，690，780。此試劑盒中的熒光染料可單獨或配合使用�？梢詫崿F(xiàn)單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo)以及更多重?zé)晒夥糯?多重同源抗體熒光標(biāo)記等功能，大豐富了此試劑盒的內(nèi)涵。

　　BUNSEN本生詳述試劑盒組成：

　　480熒光染料(即用型，5mL),-20℃;520熒光染料(綠光)(即用型，5mL),-20℃;570熒光染料(紅光)(即用型，5mL)，-20℃;-620熒光染料(即用型，5mL)，-20℃;690熒光染料(即用型，5mL)，-20℃;780熒光染料(即用型，5mL)，-20℃;TSA+增強劑，100ul，-20℃(可選);

　　高敏多聚hrp山羊抗兔二抗(20mL)4℃。

　　備注：480熒光染料、520熒光染料、570熒光染料、620熒光染料、690熒光染料、780熒光染料在-20度下，均為固體，使用之需解凍。

　　TSA+增強劑使用方法：TSA+增強劑能夠進(jìn)一步增強熒光信號放大液的放大信號5-10倍，TSA+增強劑：熒光放大液=1:500，使用TSA+增強劑不是必須的選項，可以根據(jù)具體的情況選擇添加或者不選擇添加。

　　操作流程：

　　1、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲benⅠ15min-二甲ben Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ。取出放在通風(fēng)廚內(nèi)，酒精晾干后放入自來水中稍洗，蒸餾水洗。

　　2、抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿PH9.0EDTA堿性抗原修復(fù)液或者PH6.0檸檬酸修復(fù)緩沖液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)(也可以用高壓1-2min100度水煮15min95度水浴20min

　　七色多重?zé)晒馊旧�試劑�? 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。