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熱點新聞:胎牛血清凍存有哪些注意事項
血清溶解建議-如何減少沉淀:
● 將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱12-24小時左右使之浴解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
● 切勿將剛剛從-20℃冰箱里拿出來的血清直接放在水浴中,無論室溫的水或者37℃的水,因為在水浴中血清迅速熔化,很大的溫差(-20℃到37℃,溫差為57℃)其容易造成血清產(chǎn)生沉淀。
● 直接放65℃水浴中更是其殘忍的做法,是對血清的褻玩,對科學規(guī)則的粗暴踐踏!
● 血清應該在-10℃以下保存。若一次無法用完一瓶,應該無菌分裝,再冷凍保存。
胎牛血清凍存的注意事項:
1. 需要長期保存的血清有必要儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時刻切勿超過1個月。由于血清結冰時體積會增加約10%,因而,血清在凍入低溫冰箱,有必要預留一定體積空間,不然易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
2. 合規(guī)生產(chǎn)企業(yè)供給的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾器過濾血清。
3. 瓶裝血清凍結需采用逐漸凍結法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,在溶解過程中需不斷悄悄搖晃均勻(小心勿形成氣泡),使溫度與成分均一,削減沉積的發(fā)作。切勿直接將血清從-20℃進入37℃融化,溫差大的情況下血清容易形成蛋白質凝聚而出現(xiàn)沉積和沉淀絮狀物。
4. 熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已徹底凍結的血清。加熱過程中須規(guī)矩搖晃均勻。目的是使血清中的補體成分(complement)滅活,除非有必要,一般不建議做此熱處理,因為熱處理會形成血清沉積增多,而且還會影響血清的質量。補體參與反應有:滑潤肌細胞收縮、肥大細胞和血小板釋放組胺、增強吞噬作用、促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)作化學趨化和活化。相關研究的使用者可以考慮血清增加熱滅活處理。
5. 切勿將血清在37℃放置太久或者反復凍融,不然血清會變得污濁,同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質量。
6. 血清融化后的沉淀主要是血清中的脂蛋白變性及凍結后血清中纖維蛋白形成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量?煞盅b至無菌離心管400g離心去除,也可不用處理直接加入培養(yǎng)基內(nèi)一起培養(yǎng)。完全不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
7. 顯微鏡下小黑點是由于經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多,有些沉淀物在顯微鏡呈現(xiàn)為黑點,常誤認為血清受污染。
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