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　　技術(shù)文章：試劑A—抗壞血酸過氧化物酶(APX)試劑盒
 

　　產(chǎn)品說明：

　　APX是抗壞血酸代謝的關(guān)鍵酶，也是植物清除活性氧的重要抗氧化酶。APX于葉綠體、胞質(zhì)、線粒體、過氧化物和乙醛酸體，以及過氧化體和類囊體膜上分別具有多種同功酶。APX是植物AsA的主要消耗者，它可以催化H2O2氧化AsA。在脅迫和解脅迫條件下，APX 與 AsA 具有一定的負(fù)相關(guān)性，APX的活性可以直接影響AsA的含量。APX催化H2O2氧化AsA，通過測定AsA的氧化速率，可計算得APX活力。實驗需要低溫離心機(jī)、紫外分光光度計、1ml石英比色皿、研缽、移液槍、冰和蒸餾水等儀器和試劑：。

　　操作步驟：

　　一、粗酶液提�。�

　　組織質(zhì)量(g)為例：試劑的體積(ml)為1：5~10的比例(建議稱取約0.1g組織，加入1ml 試劑A)在冰水浴中勻漿。13000g，4℃離心20min，取上清放在冰上待測。

　　二、測定操作表：

　　1. 分光光度計需提預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到290nm，用蒸餾水調(diào)零。

　　2. 試劑A需要在25℃中預(yù)熱30min以上。

　　3. 測定管：在1ml石英比色皿中依次加入100μl上清液、700μl預(yù)熱的試劑A、100μl試劑B 和100μl試劑C，快速混合均勻后在290nm測定10s和130s光吸收A2和 A1，△ A=A2-A1。

　　APX 活力計算：

　　(1)按樣本蛋白濃度計算活性

　　單位定義：1U=每毫克蛋白每分鐘氧化1μmolAsA。

　　APX(μmol/min/mgprot)=△A÷(ε×d)×V 反總×106÷(Cpr×V 樣)÷T =1.79×△A÷Cpr

　　(2)按樣本質(zhì)量計算

　　單位的定義：1U=每g組織每分鐘氧化1μmolAsA。

　　APX(U/g)=△A÷(ε×d)×V 反總×106÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=1.79×△A÷W ε：AsA 在 290nm 處摩爾吸光系數(shù)為 2.8×103L/mol/cm;d：比色皿光徑(cm)，1cm;V 反總：反應(yīng)體系總體積(L)，1000μl=1×10-3L;106：1mol=1×106μmol;V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積(mL)，100μl=0.1ml;V 樣總：加入提取液體積，1ml;W，樣本質(zhì)量，g;T：催化反應(yīng)時間(min)，2min。

　　注意事項：試劑配制好后需4℃保存，并且在3天內(nèi)使用完。

　　抗壞血酸過氧化物酶(APX)試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。本生移液器吸頭