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技術(shù)文章：堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(磷酸苯二鈉比色法)
閱讀次數(shù)：411 發(fā)布時間：2023/7/31 11:08:24

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　　堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(磷酸苯二鈉比色法)

　　產(chǎn)品簡介：

　　堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi)，其活性適pH9.2~9.8。

　　堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(磷酸苯二鈉比色法)(AlkalinePhosphataseColorimetricAccayKit)采用磷酸苯二鈉比色法，其檢測原理是磷酸苯二鈉在堿性條件下，可在堿性磷酸酶的作用下生成游離的酚和磷酸。通過分光光度比色法測定510nm處吸光度，據(jù)此通過比色分析就可以算出堿性磷酸酶的活性。該試劑盒用于檢測細(xì)胞或組織的裂解液或勻漿液、血液、血清等樣品中內(nèi)源性的堿性磷酸酶活性。該試劑盒僅用于科研域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

組成：

產(chǎn)品名稱	KE001-50T	KE001-100T	Storage
試劑(A):ALPAssaybuffer	25ml	50ml	4℃避光
試劑(B):ALP顯色液	25ml	50ml	-20℃避光
試劑(C):顯色基液	75ml	150ml	-20℃避光
試劑(D):Phenol標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)	1ml	2ml	RT
試劑(E):ddH2O	5ml	10ml	RT
說明書	一份

儲存條件：

4℃，三個月有效。

操作步驟（僅供參考）：

1、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液：按照下表稀釋系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

	0	1	2	3	4	5
Phenol(0.05mg/ml)(ml)	0	0.1	0.2	0.3	0.4	0.5
ddH2O(ml)	0.55	0.45	0.35	0.25	0.15	0.05
相當(dāng)于金氏單位(U/L)	0	10	20	30	40	50

2、準(zhǔn)備樣品：①細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，低速離心取上清，-80℃凍存，用于堿性磷酸酯酶的檢測。②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，尿液通常也可以直接用于測定，-80℃凍存，但為了消除樣品本身顏色的干擾，需設(shè)置加了血漿或血清但不加底物的對照。③高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的堿性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS等進(jìn)行稀釋，如雞血清、血漿可稀釋5～10倍后檢測。

3、加樣：按照下表設(shè)置對照管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的堿性磷酸酯酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。樣品的檢測好能設(shè)置平行管。

加入物ml	對照孔	標(biāo)準(zhǔn)孔	測定孔
Phenol標(biāo)準(zhǔn)（1-5號管）		0.55
待測樣品			0.55
ALPAssaybuffer	0.50	0.50	0.50

37℃水浴中孵育5min

ALP顯色液（37℃提孵溫）

0.50

立即混勻，37℃水浴中準(zhǔn)確孵育5min

顯色基液	1.50	1.50	1.50
待測樣品	0.55

4、用分光光度計，以0號管(ddH2O)調(diào)零，讀取對照管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管的510nm吸光(即A對照、A標(biāo)準(zhǔn)、A測定)，如無法檢測510nm，亦可檢測500～530nm范圍內(nèi)吸光，一般應(yīng)數(shù)小時內(nèi)檢測完畢。

計算結(jié)果：

以系列Phenol標(biāo)準(zhǔn)(1～5號管)對應(yīng)的金氏單位為x軸，以相應(yīng)的A(1～5號管)為y軸，A測定-A對照的差值為實際的吸光度，用該差值與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行對比，求出酶活力單位。

參考區(qū)間（37℃）：

1、健康成年人：3～13金氏單位。

2、健康兒童：5～28金氏單位。

注意事項：

1、待測樣品中不能含有磷酸酶抑制劑，同時需避免反復(fù)凍融。

2、如果沒有分光光度計，也可以使用酶標(biāo)儀測定。

3、所測樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，應(yīng)稀釋樣品后重新測定。

4、空白管如果顯紅色，說明ALP顯色液不可用，應(yīng)丟棄。

5、加入顯色基液時，應(yīng)迅速，并且及時混勻，否則顯色不充分。

6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

7、本產(chǎn)品僅供科研使用，嚴(yán)禁它用。

　　堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。本生移液器吸頭