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　　ELISA常見問題與解決方法

　　1. 陰性對(duì)照出現(xiàn)陽性結(jié)果

　　① 樣品、試劑被污染，或加樣時(shí)操作不當(dāng)導(dǎo)致相鄰孔之間溶液濺灑出現(xiàn)交叉污染——更換試劑，小心操作。

　　② 酶標(biāo)板洗滌不徹底——洗板先將抗體溶液倒干凈，然后清洗液倒?jié)M板孔，確保能充分洗滌。

　�、� 抗體量過多導(dǎo)致非特異性結(jié)合——根據(jù)說明書的推薦量使用抗體，稀釋抗體到適當(dāng)濃度。

　　2.酶標(biāo)板整體背景高

　　① 抗體非特異性結(jié)合——應(yīng)確保板孔進(jìn)行了封閉并且使用的是恰當(dāng)?shù)姆忾]液以防止非特異性結(jié)合。

　�、� 底物結(jié)合濃度過高——對(duì)底物進(jìn)行適當(dāng)稀釋。

　　③ 反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)——當(dāng)酶標(biāo)板顯色足夠進(jìn)行吸光度讀數(shù)時(shí)立即使用終止液終止反應(yīng)，適當(dāng)縮短顯色時(shí)間。

　�、� 底物溶液污染——正常底物溶液應(yīng)是澄清透明的，若出現(xiàn)黃色或其他顏色表明受到污染，應(yīng)更換新的底物溶液。

　�、� 底物孵育過程沒有避光——底物孵育應(yīng)在避光條件下進(jìn)行。

　　3. 復(fù)孔之間重復(fù)性差

　�、� 樣品數(shù)量不整齊，加樣時(shí)間有長(zhǎng)有短——加重復(fù)孔時(shí)盡量保持加樣時(shí)間與次接近。

　　② 加樣量不一致——樣品稀釋應(yīng)充分混勻，并且使用同一移液槍。

　�、� 洗滌條件、操作人員不一致——重復(fù)測(cè)定樣品時(shí)，操作條件、人員應(yīng)盡可能與上次保持一致。

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