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　　技術(shù)解答：實(shí)驗(yàn)操作中常見的八個(gè)實(shí)驗(yàn)問題及解答
 

　　1. M與mol/l的換算關(guān)系?

　　M即mol/l，mM即mmol/l，μM即μmol/l，nM即nmol/l，pM即pmol/l，fM即fmol/l。

　　1M=103mM=106μM=109nM=1012pM=1015fM

　　2. 實(shí)驗(yàn)操作中常說的室溫究竟是多少溫度?

　　生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的室溫通常指20-25℃，而不是實(shí)際的室內(nèi)溫度。

　　3. 離心力(×g)和每分鐘轉(zhuǎn)速(rpm)如何換算?

　　轉(zhuǎn)速有離心力(×g)和每分鐘轉(zhuǎn)速(rpm)兩種表示方式，有些離心機(jī)設(shè)置有rpm和xg顯示，但普通離心機(jī)沒有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算：

　　g=r×11.18×10-6×rpm2 (r 為有效離心半徑，即從離心機(jī)軸心到樣品中心位置的長度，單位為厘米)

　　例如: 轉(zhuǎn)速為3000rpm，有效離心半徑為10 cm，則離心力為=10×11.18×10-6×30002=1006.2(×g)。

　　4. 凍存試劑或樣品可以室溫或37℃水浴解凍嗎?

　　凍存試劑或樣品的解凍，如果時(shí)間比較充裕，建議在冰浴或冰水浴上緩慢解凍。如果時(shí)間比較著急，大多數(shù)凍存的試劑或樣品是可以在室溫或37℃水浴解凍，但都必須特別小心，必須邊觀察、邊輕輕晃動(dòng)、邊融解。待部分溶解后即需從水浴中取出，確保溶解過程中試劑或樣品還是接近0℃的。如果該試劑或樣品在0℃不會(huì)結(jié)凍，解凍后可以置于冰浴或冰水浴。

　　5. 微量液體試劑如何量取?

　　(1)在開啟裝有微量試劑的離心管之，宜先適當(dāng)離心(500-2000rpm離心5即可)。這一步很重要，目的是將因運(yùn)輸顛倒而粘于管壁和蓋子上的試劑收集至管底以供使用。

　　(2)微量液體樣品宜盡量減少量取次數(shù)，以減少不必要的損耗。每多量取一次會(huì)損耗0.5-數(shù)微升不等的試劑，例如總體積為100μl的試劑，每次量取5μl，通常不太可能量取20次的。

　　(3)事先計(jì)算好樣本數(shù)量和試劑使用量，一次性量取配制出一定量的工作液后，再分裝至各反應(yīng)管之中。這樣可以減少試劑量取的次數(shù)。

　　(4)好使用經(jīng)校驗(yàn)的、精密度高、合適量程的微管移液槍及槍頭，否則會(huì)有超乎想像的誤差和損耗。如果是連續(xù)量取，每次量取都宜更換槍頭，否則會(huì)導(dǎo)致次吸取后每次的吸取體積明顯偏大。

　　(5)移液槍吸取操作時(shí)，宜垂直進(jìn)入液面數(shù)毫米。槍頭通常不宜直接插入管底，略低于液面即可，避免試劑過多粘于槍頭造成損耗。慢吸，緩慢松開控制按鈕，否則液體進(jìn)入吸頭過速會(huì)導(dǎo)致少量液體倒吸入移液器內(nèi)部，導(dǎo)致終打出時(shí)的體積減少。

　　(6)打出液體時(shí)槍頭貼壁并有一定角度，慢放，即緩慢打出液體。

　　6. 對(duì)于微量粉末試劑如何操作及使用?

　　(1)在開啟裝有微量試劑的離心管之，宜先適當(dāng)離心(500-2000rpm離心5即可)。這一步很重要，目的是將因運(yùn)輸顛倒而粘于管壁和蓋子上的試劑收集至管底以供使用。

　　(2)對(duì)于10mg或以下的微量固體樣品，通常不建議再使用天平進(jìn)行稱量，而宜直接按照產(chǎn)品標(biāo)簽上標(biāo)示的量進(jìn)行溶液的配制。例如5mg的粉末試劑，很多時(shí)候很難從離心管中全部取出來的，但可以在該離心管內(nèi)全部配制成適當(dāng)?shù)娜芤骸��?duì)于量略多一些的微量粉末樣品，也宜盡量減少稱量次數(shù)，通常建議每次稱量的重量不少于10mg。多次微量的稱量可能會(huì)由于稱量誤差導(dǎo)致每次的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生偏差。對(duì)于微量的粉末，如果不涉及溶液保存的穩(wěn)定性方面的問題，通常建議一次性將所有的粉末試劑按標(biāo)注的劑量配制完畢。

　　(3)如果需要稱量，請(qǐng)注意使用靈敏度較高的分析天平，使用進(jìn)行校準(zhǔn)。另外，稱量時(shí)不建議帶乳膠手套(可以戴一次性薄膜手套)，以防止乳膠手套和稱量紙之間產(chǎn)生的靜電影響稱量的準(zhǔn)確性。稱量20-30mg或更小重量時(shí)，不可以戴乳膠手套。我們測(cè)試過的多種乳膠手套(包括某些品牌的進(jìn)口乳膠手套)，在用乳膠手套接觸(摩擦)稱量紙后會(huì)產(chǎn)生靜電，從而會(huì)影響稱量的準(zhǔn)確性，誤差可以達(dá)到數(shù)毫克。而使用聚乙烯材質(zhì)的薄膜手套，即所謂的PE薄膜手套(類似于保鮮膜材質(zhì))，接觸稱量紙則不會(huì)產(chǎn)生靜電，此時(shí)誤差較小。

　　7. 試劑或試劑盒存放時(shí)搞錯(cuò)保存溫度，是否會(huì)影響其使用效果或是否能繼續(xù)使用?

　　對(duì)于很多試劑雖然要求低溫保存，但這是長期保存的條件，很多時(shí)候是完全可以在4℃甚至室溫短時(shí)間保存的。對(duì)于具體的某種試劑或試劑盒是否可以繼續(xù)使用，請(qǐng)?jiān)O(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品或陽性對(duì)照進(jìn)行檢測(cè)，如果標(biāo)準(zhǔn)品或陽性對(duì)照的檢測(cè)結(jié)果正常即可繼續(xù)使用。

　　8. 試劑已經(jīng)變色是否還能用?

　　不能用。試劑變色通常由于試劑的不穩(wěn)定引起，變色很多時(shí)候表明試劑已經(jīng)變質(zhì)。對(duì)于需要低溫或避光保存的試劑一定要低溫或避光保存。

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