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　　本周熱點(diǎn) ELISA實(shí)驗(yàn)操作失敗的主要原因
 

　　ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外，有時常可見到一些錯誤結(jié)果(即假陽性或假陰性)，那么致使實(shí)驗(yàn)不成功的主要原因有哪些咧?下面我們一起來看看本生技術(shù)小編為大家推薦，本周焦點(diǎn)：ELISA實(shí)驗(yàn)操作失敗的主要原因。

　　一、標(biāo)本受細(xì)菌污染：因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。

　　第二，標(biāo)本的影響：溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O)，從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，產(chǎn)生假陽性。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。

　　第三，標(biāo)本凝固不全：在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果;因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

　　第四，標(biāo)本保存不當(dāng)：在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成假陽性;為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定，5d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。

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