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將您了解pcr耗材,八聯(lián)排管、pcr96孔板的選擇!
閱讀次數(shù):413 發(fā)布時間:2022/8/11 9:47:01
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  標(biāo)簽:pcr耗材 八聯(lián)排管 pcr96孔板 BUNSEN本生


  將您了解pcr耗材,八聯(lián)排管、pcr96孔板的選擇!

  市面上的PCR耗材有很多,各種品牌、規(guī)格、顏色等,讓人眼花繚亂。BUNSEN本生教您慢慢認(rèn)識它。材質(zhì)PCR耗材的原材料通常是聚丙烯。它是一種很好的耐熱惰性物質(zhì)(使用溫度范圍為-30~140℃),能夠承受PCR反應(yīng)熱循環(huán)過程中的熱能變化,很好地封閉和保護(hù)PCR反應(yīng)體系中的物質(zhì)。

  顏色常見的有白管和透明管。在傳統(tǒng)PCR實驗中,兩者沒有區(qū)別:

  qPCR的核心數(shù)據(jù)是Ct值,而熒光信號是Ct值計算的數(shù)據(jù)來源,所以管內(nèi)的熒光能否完好地傳遞至檢測器是至關(guān)重要的。白色的管壁能夠阻止熒光穿過管壁和折射(下圖A),進(jìn)而防止熒光傳至加熱模塊(放管子的金屬孔壁),被模塊吸收或發(fā)生不一致反射等情況。相比于透明管,在白管的頂端能夠采集到更強(qiáng),更聚焦的熒光信號。

  >>注意不要讓耗材長期暴露在空氣中,取出耗材后,一定要快速封好包裝袋,避免用裸手接觸。有條件的話,可在超凈臺中操作。容量/尺寸/通量

  容量決定了可加樣的多少(反應(yīng)體積)。加樣過多會導(dǎo)致熱傳導(dǎo)效率下降,溢出或交叉污染;而加樣不足會引起樣品蒸發(fā)損耗。qPCR儀的加熱模塊也會決定可適配的耗材和適用的反應(yīng)體系大小。通量很容易理解,就是單次實驗?zāi)苌隙嗌賯樣品。常見的容量和通量規(guī)格如下表所示:

  單管/八聯(lián)排0.2mL、0.1mL

  96孔板0.2mL、0.1mL

  384孔板0.02mL

  >>常見的反應(yīng)體積一般為20 μL,推薦使用0.1 mL或low profile的低容反應(yīng)管。管壁厚度

  PCR耗材的管壁厚度要均一,才能提供一致的熱傳導(dǎo)。超薄管壁較標(biāo)準(zhǔn)版薄50%,可進(jìn)一步減少熱屏障,帶來更快更好的反應(yīng)效果。當(dāng)然,建議選超薄的。

  透明度qPCR的管蓋和封膜需要具有很高的光學(xué)透性,確保的熒光信號的穿透和傳遞,減少失真(針對頂讀qPCR儀)。管壁的透明度越高反倒會影響實驗結(jié)果,理由在面解釋過。傳統(tǒng)PCR可忽略此特點。裙邊PCR板的裙邊指的是板的周圍延伸部分。額.......這個裙邊作用是在構(gòu)建反應(yīng)體系時為移液過程提供穩(wěn)定性支撐,以及結(jié)合自動化工作站時提供機(jī)械強(qiáng)度和抓手。常見的有三種:無裙邊、半裙邊和全裙邊(對應(yīng)下圖A、B、C)。

  >>簡單理解就是,裙邊的意義更多在于為工業(yè)化、自動化批量處理提供便利,與機(jī)械臂的結(jié)合。在常規(guī)科研實驗室中可能不太需要,使用無裙邊板即可。

  PCR封板膜由透明塑料或鋁箔制成。黏性透明薄膜比較常見,適配于96或384孔板,要有足夠好的光透性?梢栽诜饽r用個小卡片把孔周圍的膜壓緊,避免漏氣等現(xiàn)象。實驗室里的貼膜boy們應(yīng)該很熟悉了吧。

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