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技術(shù)文獻

中性粒細胞堿性磷酸酶染色液(NAP)2024資料已更新
閱讀次數(shù):189 發(fā)布時間:2024/6/19 13:50:54
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中性粒細胞堿性磷酸酶染色液(NAP)

 

 

測定意義:

 

堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase,簡稱ALPAKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi),其活性所需適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細胞膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內(nèi)皮,還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。

 

BUNSEN本生代理BIOISCO中性粒細胞堿性磷酸酶染色液(NAP)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時偶聯(lián)法),其原理是在pH9.29.8的堿性條件下,細胞內(nèi)堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解,釋放出磷酸與萘酚,后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物,定位于細胞質(zhì)中。該染液門用于血液或骨髓細胞涂片的中性粒細胞的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍色,位于胞槳,結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。

 

組成:

產(chǎn)品名稱

SE006-4×2ml

SE006-4×10ml

Storage

試劑(A):NAP固定液

2ml

10ml

RT 避光

試劑(B):NAP孵育液

B1:AS-BI染色液

1ml

5ml

-20 避光

B2:FBB染色液

1ml

5ml

4 避光

臨用,B1:B2混合,即為NAP孵育液,即配即用。

試劑(C):核固紅染色液

2ml

10ml

RT 避光

試劑(D):甲基綠染色液

2ml

10ml

RT 避光

說明書

 

1

 

 

保存條件:4℃避光保存,半年有效。

 

自備儀器和用品:

1、載玻片

 

2、4%多聚甲醛

2、顯微鏡

 

 

 

 

操作步驟:

 

(一) 、涂片

 

1、制備新鮮血液或骨髓細胞涂片,NAP固定液固定,充分水洗。

 

2、滴加配制好的NAP孵育液,孵育,水洗。

 

3、滴加核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染。水洗、晾干、鏡檢。

 

()貼壁培養(yǎng)細胞

 

1、取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細胞,棄液,PBS清洗干凈。

 

2、加入NAP固定液固定或多聚甲醛固定,PBS清洗。

 

3、滴加配制好的NAP孵育液,放入濕盒中,避光孵育,PBS清洗。

 

4、入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染。PBS清洗、鏡檢。

 

染色結(jié)果:

NAP陽性顆粒

藍色

細胞核

 

紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)

 

結(jié)果判斷:一般以積分報告結(jié)果,根據(jù)100個中性粒細胞陽性顆粒進行04+計分。

細胞分值

染色特點

0

無顆粒

1

稍有顆粒

2

中等程度顆粒

3

多數(shù)顆粒

4

充滿顆粒

 

 

注意事項:

1、血液或骨髓細胞涂片應(yīng)新鮮,薄厚適宜,及時固定,否則會影響酶的活性。

2、培養(yǎng)細胞染色操作過程中,清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微,以免損傷或丟失細胞。

3、NAP孵育液易失效或降低陽性強度,即配即用,不宜久置。

4、復(fù)染時,核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。

5、每次染色時,應(yīng)有陽性對照片。

6、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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