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中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)

測(cè)定意義：

堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織內(nèi)，其活性所需適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及微動(dòng)脈和毛細(xì)血管動(dòng)脈部之內(nèi)皮，還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。

BUNSEN本生代理BIOISCO中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法)，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液門用于血液或骨髓細(xì)胞涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色，位于胞槳，結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。

組成：

保存條件：4℃避光保存，半年有效。

自備儀器和用品：

2、4%多聚甲醛

操作步驟：

(一) 、涂片

1、制備新鮮血液或骨髓細(xì)胞涂片，NAP固定液固定，充分水洗。

2、滴加配制好的NAP孵育液，孵育，水洗。

3、滴加核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染。水洗、晾干、鏡檢。

(二)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1、取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細(xì)胞，棄液，PBS清洗干凈。

2、加入NAP固定液固定或多聚甲醛固定，PBS清洗。

3、滴加配制好的NAP孵育液，放入濕盒中，避光孵育，PBS清洗。

4、入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染。PBS清洗、鏡檢。

染色結(jié)果：

結(jié)果判斷：一般以積分報(bào)告結(jié)果，根據(jù)100個(gè)中性粒細(xì)胞陽性顆粒進(jìn)行0～4+計(jì)分。

注意事項(xiàng)：

3、NAP孵育液易失效或降低陽性強(qiáng)度，即配即用，不宜久置。