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　　人組織蛋白酶D(cath-D)ELISA試劑盒方法描述

　　人組織蛋白酶D(cath-D)是一種溶酶體天冬氨酸蛋白酶，具有降解蛋白質(zhì)和激活溶酶體室中生物活性蛋白體的功能。為了準(zhǔn)確、靈敏地檢測(cè)人組織蛋白酶D的含量，我們采用了雙抗體夾心法的ELISA試劑盒。下面將詳細(xì)介紹該試劑盒的方法描述。

　　一、實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒采用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人組織蛋白酶D(CTSD)水平。先，用純化的人組織蛋白酶D(CTSD)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體。然后，往包被的微孔中依次加入人組織蛋白酶D(CTSD)，再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)過(guò)洗滌后，加入底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人組織蛋白酶D(CTSD)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人組織蛋白酶D(CTSD)含量。

　　二、實(shí)驗(yàn)步驟

　　1. 包被：用0.05MPH9.6的碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。

　　2. 加標(biāo)本：加標(biāo)本需將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋?zhuān)�一般使用微量加樣器按�?guī)定的量加入板孔中。注意每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染。加樣過(guò)程中應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

　　3. 溫育：加入標(biāo)本后，進(jìn)行溫育。溫育溫度和時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有重要影響，一般需在37℃恒溫箱中溫育1小時(shí)。

　　4. 加酶結(jié)合物：溫育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌緩沖液洗3次。然后加入酶結(jié)合物，再次進(jìn)行溫育。

　　5. 顯色：溫育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌緩沖液洗3次。然后加入底物TMB，避光顯色。

　　6. 終止：顯色一定時(shí)間后，加入終止液終止反應(yīng)。此時(shí)，孔內(nèi)液體顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。

　　7. 測(cè)定：用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔OD值。注意測(cè)定需將酶標(biāo)儀預(yù)熱，并使用空白孔調(diào)零。

　　三、結(jié)果計(jì)算與分析 根據(jù)測(cè)定的OD值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人組織蛋白酶D(CTSD)含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線一般通過(guò)繪制不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品的OD值繪制而成。通過(guò)比較樣品OD值與標(biāo)準(zhǔn)曲線上的OD值，即可計(jì)算出樣品中人組織蛋白酶D(CTSD)的含量。

　　四、注意事項(xiàng)

　　1. 實(shí)驗(yàn)中使用的所有試劑和器材應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行準(zhǔn)備和操作。

　　​注：以上資料僅供參考!

　　人組織蛋白酶D試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。

原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司