技術(shù)文獻
干貨分享:ELISA實驗注意事項
1、固相載體選擇
聚苯乙/烯:具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性。
聚氯乙/烯:聚氯乙/烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙/烯高,但空白值也略高。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間性能相近。
2、包被
、侔蹇椎倪x擇:ELISA別的微孔板。
、诳贵w選擇:選擇支持ELISA實驗的抗體,根據(jù)推薦濃度稀釋或摸索適濃度。
、郯痪彌_液:pH9.6碳酸鹽緩沖液或pH7.2磷酸鹽緩沖液。
、馨粶囟龋2-8 ℃過夜包被或室溫(37℃)包被2h。
、莅粷舛龋喊粷舛入S載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化。一般包被濃度為10ug/ml-20ug/ml。
3、封閉
、侔恢笠欢ㄒ⒓捶忾](封閉非特異性抗體)。
②選擇效果較好的封閉劑(細胞培養(yǎng)BSA、Tween等)。
4、加樣及孵育
①加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。
、诜跤臅r間及溫度參考試劑盒說明書。如有條件,建議加樣孵育時使用shaker震蕩儀,推薦軌道直徑3mm,轉(zhuǎn)速在500±50rpm。
、蹤z測抗體、酶標物的稀釋比例、孵育溫度、孵育時間嚴格根據(jù)說明書提示。
、芟窗鍖τ贓LISA來說,是其關(guān)鍵的一步,ELISA的特異性。
、莘獍迥ひ欢ㄒ淮我粨Q,切勿二次甚至多次使用,以防交叉污染。
5、顯色和終止
、偈褂眯铏z查,底物在加入96孔板之應(yīng)為無色透明。
、陲@色底物需現(xiàn)配現(xiàn)用,避免污染。
③孵育時間,說明書上為參考范圍,但具體需要根據(jù)實驗條件自行摸索。
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原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司
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