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BUNSEN本生快訊:Elisa試劑盒原理及相關(guān)檢測方法2024動態(tài)已更新
閱讀次數(shù):15277 發(fā)布時間:2024/1/19 9:19:31
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  BUNSEN本生快訊:Elisa試劑盒原理及相關(guān)檢測方法

  elisa試劑盒介紹

  ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。 ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,得到科研工作者的及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化域的長足發(fā)展。 Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各域中。

  elisa試劑盒原理

  酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到?>聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。
 


 

  分類方法

  夾心法

  夾心法常用于檢測大分子抗原,一般的操作步驟為:

  將具有一性的抗體固著(coating)于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體;

  加入待測檢體,檢體中若含有待測的抗原,則其會與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行一性鍵結(jié);

  洗去多余待測檢體,加入另一種對抗原一的一次抗體,與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié);

  洗去多余未鍵結(jié)一次抗體,加入帶有酶的二次抗體,與一次抗體鍵結(jié);

  洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果。

  間接法

  間接法常用于檢測抗體,一般的操作步驟為:

  將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余的抗原;

  加入待測檢體,檢體中若含有待測的一次抗體,則其會與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行一性鍵結(jié);

  洗去多余待測檢體,加入帶有酶的二次抗體,與待測的一次抗體鍵結(jié);

  洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酶呈色,藉儀器(ELISA reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。

  競爭法

  競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,一般用于檢測小分子抗原,其操作步驟為:

  將具有一性的抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體;

  加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行一性鍵結(jié);

  加入帶有酶的抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競爭法之由來;

  洗去檢體與帶有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少,顯色也就越淺。

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