實(shí)驗(yàn)分享：PCR實(shí)驗(yàn)步驟 2023動(dòng)態(tài)已更新_技術(shù)文章

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技術(shù)文獻(xiàn)

實(shí)驗(yàn)分享：PCR實(shí)驗(yàn)步驟 2023動(dòng)態(tài)已更新
閱讀次數(shù)：15320 發(fā)布時(shí)間：2023/10/13 9:21:47

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　　實(shí)驗(yàn)分享：PCR實(shí)驗(yàn)步驟

　　PCR即聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)不僅是DNA分析常用的技術(shù)，而且在DNA重組與表達(dá)、基因結(jié)構(gòu)分析和功能檢測中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

　　1. PCR體系中的5個(gè)要素：模板(Template)，引物(Primer)，酶(polymerase)，dNTP，緩沖液(Buffer，含有Mg2+)。現(xiàn)在許多公司已推出酶、dNPT、Buffer配成的Mix Buffer，使用更為方便。

　　2. 20uL的PCR反應(yīng)體系：

　　模板DNA 2μL

　　引物1 1μL，10～100pmol

　　引物2 1μL，10～100pmol

　　dNTP 1.5μL，各200umol/L

　　MgCl2 2μL

　　10×buffer 2μL

　　ddH2O 10μL

　　Taq酶 0.5μL(2.5U)

　　在PCR管中依次加入上述溶液，Taq酶后加入。

　　3. PCR反應(yīng)條件:

　　預(yù)變性：95℃ 3min

　　變性：95℃ 45s

　　退火：45℃ 45s

　　延伸： 72℃ 45s

　　延伸：5min

　　結(jié)束：4℃

　　其中變性-延伸過程循環(huán)30次。

　　現(xiàn)在有些PCR因?yàn)閿U(kuò)增區(qū)很短,即使Taq酶活性不是也能在很短的時(shí)間內(nèi)復(fù)制完成,因此可以改為兩步法,即退火和延伸同時(shí)在60℃-65℃間進(jìn)行,以減少一次升降溫過程,提高了反應(yīng)速度.

　　PCR 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司