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　　1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)酶聯(lián)免疫分析(ELISA試劑盒使用說明書

　　本試劑盒僅供研究使用.

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測定血清,血漿及相關液體樣本中1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量.

　　實驗原理

　　本試劑盒應用酶聯(lián)免疫競爭法測定標本中1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)水平.用純化的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG),和HRP標記的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)抗原,使它們競爭結合,,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色.樣本顏色的深淺和樣品中的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量呈負相關.用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量.

　　試劑盒組成：

　　130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶

　　8標準品S1(1600pg/ml)0.5ml×1瓶

　　2酶標試劑6ml×1瓶標準品S2(800pg/ml)0.5ml×1瓶

　　3酶標包被板12孔×8條標準品S3(400pg/ml)0.5ml×1瓶

　　4顯色劑A液6ml×1瓶標準品S4(200pg/ml)0.5ml×1瓶

　　5顯色劑B液6ml×1瓶標準品S5(100pg/ml)0.5ml×1瓶

　　6終止液6ml×1/瓶9說明書1份

　　7樣品稀釋液6ml×1/瓶10封板膜2張

　　標本要求

　　1.標本處理：(1)水樣 采集后經(jīng) -20℃反復凍融三次,再經(jīng)玻璃纖維過濾后,備查

　　(2)組織 樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提,或按相關文獻提取進行,提取后應盡快進行實驗.若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,備查

　　2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性.

　　操作步驟

　　1. 加樣：分別設標準孔 空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 待測樣品孔.在酶標包被板上標準孔中加50微升,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍).加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻.

　　2. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外.

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘.

　　4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,如此重復5次,拍干.

　　6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

　　7. 終止：每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色).

　　8. 測定：以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值). 測定應在加終止液后15分鐘以內進行.

　　計算

　　以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度.

　　注意事項

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存.

　　2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果.

　　3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差.一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣.

　　4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔.如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5).

　　5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.

　　6.底物請避光保存.

　　7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

　　8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理.

　　9.本試劑不同批號組分不得混用.

　　檢測范圍：

　　30pg/ml-1800pg/ml

　　規(guī)格：

　　96人份/盒

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃.

　　2.有效期：6個月

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原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司