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　　本生闡述：細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇與常見(jiàn)問(wèn)題解答
 

　　細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;具體選擇時(shí)根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩�定�?/p>

　　1)平底和圓底(U型和V型)培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇：

　　貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板。懸浮型細(xì)胞的培養(yǎng)一般用V型。U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞 。V型培養(yǎng)板有時(shí)用做免疫學(xué)血凝集的實(shí)驗(yàn)。

　　不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什么類型的細(xì)胞都可用，但當(dāng)細(xì)胞數(shù)目較少，如做克隆時(shí)，就用96孔平底板，另外，做MTT等實(shí)驗(yàn)時(shí)，無(wú)論貼壁和懸浮細(xì)胞，一般均用平底板。

　　至于U或V型板，一般在某些特殊要求時(shí)才使用。如在免疫學(xué)方面，當(dāng)做兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時(shí)，需要二者相互接觸以刺激，因此，一般需要U型板，因細(xì)胞會(huì)由于重力的作用而聚集在一個(gè)很小的范圍內(nèi)。

　　V型板的用途更少，一般用于細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)時(shí)，為了使效靶細(xì)胞緊密接觸，常使用V型板，但這種試驗(yàn)也可用U型板替代(加入細(xì)胞后，低速離心)如果是養(yǎng)細(xì)胞的話，通常是選用平底的。

 

　　圓底的好像沒(méi)聽說(shuō)過(guò)拿來(lái)養(yǎng)細(xì)胞。圓底的通常是拿來(lái)做分析， 化學(xué)反應(yīng)， 或是保存樣品用的， 因?yàn)閳A底比較好將液體吸得干凈，如果用平底的就不好吸了。不過(guò)， 如果你是要測(cè)吸光值的話， 一定要買平底的才行。大部分細(xì)胞培養(yǎng)都用平底培養(yǎng)板，便于鏡下觀測(cè)、有明確的底面積、細(xì)胞培養(yǎng)液面高度相對(duì)一致，還便于MTT檢測(cè)。圓底培養(yǎng)板主要用于同位素?fù)饺氲膶?shí)驗(yàn)，需要用細(xì)胞收集儀收集細(xì)胞的培養(yǎng)，如“混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)”等。

　　2)細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題與解答

　　問(wèn)：我看到培養(yǎng)板有4、6、12、24、48、96孔幾種規(guī)格 ，但不知道到底什么實(shí)驗(yàn)用哪種規(guī)格。

　　答：要根據(jù)你具體的實(shí)驗(yàn)要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，細(xì)胞爬片一般用24孔等，要具體根據(jù)你實(shí)驗(yàn)來(lái)定。

　　問(wèn)：我想測(cè)吸光度用酶標(biāo)儀，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板行嗎?請(qǐng)問(wèn)酶標(biāo)板多孔細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?

　　答：用多空細(xì)胞培養(yǎng)板測(cè)吸光度肯定可以拉，我們經(jīng)常用它來(lái)做樣品的蛋白定量和MTT檢測(cè)。

　　區(qū)別：酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴，細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng)，但也可以用來(lái)測(cè)蛋白濃度;酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板，一般不能用做細(xì)胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測(cè)，它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液。

　　常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范圍，結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量。若加液量過(guò)多會(huì)影響氣體(氧氣)交換，而且在搬動(dòng)過(guò)程中易溢出造成污染。具體所加細(xì)胞密度依實(shí)驗(yàn)的目的不同靈活掌握。

　　3)細(xì)胞培養(yǎng)板的密閉和污染問(wèn)題

　　細(xì)胞培養(yǎng)板的加樣和操作：細(xì)胞培養(yǎng)板在進(jìn)行細(xì)胞操作時(shí)同樣遵循嚴(yán)格無(wú)菌的原則，各項(xiàng)操作要規(guī)范、科學(xué)，不對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)造成額外的影響。這其中常見(jiàn)的問(wèn)題就是如何加樣后細(xì)胞的均勻和盡量減少換液對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響。

　　問(wèn)：96，24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿的蓋子都很松，這樣是方便了透氣，但是細(xì)菌、霉菌等污染物會(huì)不會(huì)也隨著溜進(jìn)去呢?

　　答：

　　1. 蓋子很松，屬于半開放培養(yǎng)，這樣的目的是透氣(實(shí)際上是為了使培養(yǎng)皿外的co2能夠與培養(yǎng)皿充分交換，維持培養(yǎng)基的pH值)。

　　2. 凡事有利必有弊，這樣當(dāng)然增加了污染的可能性。此外這樣還會(huì)使培養(yǎng)皿內(nèi)的液體蒸發(fā)，這對(duì)于定量的藥物來(lái)說(shuō)就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的：

　　a 培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須清潔(定期紫外線照，酒精擦洗，盡量少開關(guān)培養(yǎng)箱);

　　b 培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度必須始終保持為100%(培養(yǎng)箱內(nèi)放置無(wú)菌蒸餾水的水槽)。

　　就好像培養(yǎng)皿，也是一個(gè)蓋倒扣的容器，也不會(huì)污染。主要是因?yàn)樯w子“L”型邊緣產(chǎn)生氣流負(fù)壓的緣故，灰塵上面才附著有微生物，而氣流攜帶的灰塵是無(wú)法通過(guò)產(chǎn)生負(fù)壓的蓋邊緣的。而透氣作用只是通過(guò)空氣的擴(kuò)散，不會(huì)產(chǎn)生氣流，所以只會(huì)透氣不會(huì)透菌。

　　問(wèn)：我使用24孔板，在其中的某些孔中有操作(在超凈臺(tái)內(nèi))，而其它孔中還有細(xì)胞要培養(yǎng)，我很擔(dān)心這樣會(huì)污染，不知道要注意什么?大家不知道有什么好的建議。

　　答：在超凈臺(tái)內(nèi)如果操作規(guī)范的話應(yīng)該可以的，我想你可以充分利用培養(yǎng)版的蓋子，盡量只暴露要操作的孔，將其它孔用蓋子蓋起來(lái)。這是我的一點(diǎn)粗淺的見(jiàn)解，拋磚引玉吧!

　　4)細(xì)胞分布不均及解決辦法

　　問(wèn)：我的細(xì)胞接種培養(yǎng)板，細(xì)胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊?我看園子里有的戰(zhàn)友的細(xì)胞卻是聚集在中間，是不是板子的質(zhì)量問(wèn)題啊?

　　答：請(qǐng)問(wèn)你的細(xì)胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板?如果是后者，而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細(xì)胞甩到周邊部分，導(dǎo)致細(xì)胞中間少，四周多!自己可是試試!

　　周邊一般是相對(duì)會(huì)多一點(diǎn)，但是中間的數(shù)量也不會(huì)很少啊~~ 鋪板的時(shí)候我也沒(méi)有特異去振蕩培養(yǎng)板。

　　一個(gè)好辦法：在你培養(yǎng)種板之，把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里進(jìn)行幾個(gè)小時(shí)的飽和后再取出，種入細(xì)胞時(shí)力量要輕，可采取用滴頭在培養(yǎng)板孔的側(cè)面慢慢加入讓細(xì)胞懸液流入板孔中，培養(yǎng)的細(xì)胞基本是均勻生長(zhǎng)。記住千萬(wàn)不要用振蕩器振蕩，否則你的細(xì)胞就會(huì)想你說(shuō)得那樣聚積在一起。

　　5)6孔板接種和換液?jiǎn)栴}：

　　問(wèn)：我的細(xì)胞傳代很正常，但一種到六孔板里(不管加藥和對(duì)照)，總有兩三個(gè)孔(隨機(jī))細(xì)胞長(zhǎng)得不好，很小，像破碎了。有人遇到過(guò)這種情況嗎?到底是啥原因呢?請(qǐng)各位指點(diǎn)

　　答：可能跟你加液的溫度有關(guān)。如果你細(xì)胞剛剛拿出來(lái)?yè)Q液加液，培養(yǎng)基也是從4度冰箱拿出來(lái)不久，很容易細(xì)胞就會(huì)凍死了。建議你把培養(yǎng)基先在培養(yǎng)箱里邊孵育15min先。

　　6)24孔板接種問(wèn)題：

　　問(wèn)：把細(xì)胞消化接種到24孔板之后，已經(jīng)四天了，老是每孔的中間部分長(zhǎng)不滿，每天換液時(shí)都用PBS 清洗，第二天換液時(shí)都出現(xiàn)同樣的情況，每孔的邊緣長(zhǎng)的很好，中央大量死細(xì)胞?我是選擇孔內(nèi)鋪蓋玻片，在玻片上種植。每次換液都用PBS洗，必要的步驟嗎?另外，也有可能和細(xì)胞種類有關(guān)或者和培養(yǎng)液有關(guān)?

　　答：1. 我想你的培養(yǎng)液可能加的太少了。由于表面張力的作用，培養(yǎng)板的邊緣液體會(huì)向上走，造成培養(yǎng)液面呈現(xiàn)一個(gè)凹面(就像量筒的液體凹面一樣)，中央的細(xì)胞正好在凹面的處，培養(yǎng)液少，細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)不夠，甚至干涸掉，空氣中的氧氣也會(huì)造成損傷，即使有增值過(guò)來(lái)的細(xì)胞也會(huì)死掉。

　　細(xì)胞培養(yǎng)板本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。

原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司