豚鼠（Guinea Pig）白介素4（IL-4）ELISA檢測試劑盒技術文獻_技術文章

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豚鼠（Guinea Pig）白介素4（IL-4）ELISA檢測試劑盒技術文獻
閱讀次數：15724 發(fā)布時間：2021/1/19 13:55:46

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豚鼠（Guinea Pig）白介素4（IL-4）ELISA檢測試劑盒技術文獻

試驗原理：

IL-4試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知IL-4濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IL-4和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-4的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制：

試劑盒成份	96孔配置	48孔配置
96/48人份酶標板	1塊板（96T）	半塊板（48T）
塑料膜板蓋	1塊	半塊
標準品：480pg/ml	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
空白對照	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
標準品稀釋緩沖液	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
生物素標記的抗IL-4抗體	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
親和鏈酶素-HRP	1瓶（12ml）	1瓶（5ml）
洗滌緩沖液	1瓶（20ml）	1瓶（10ml）
底物A	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
底物B	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
終止液	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）

自備材料：

1. 蒸餾水。

2. 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

樣品收集、處理及保存方法：

1、血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原

和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅

細胞迅速小心地分離。

2、血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、保存……如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作注意事項：

● 試劑應按標簽說明書儲存，使用恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

● 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

● 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質使用。

● 使用次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

● 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

● 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

● 加入試劑的順序應致，以保證所有反應板孔溫育的時間樣。

● 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

安全性：

1. 避免直接接觸終止液和底物A、B，旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2. 實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

試劑的準備：

1. 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

480 pg/ml	（6號標準品）	原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
240 pg/ml	（5號標準品）	100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
120 pg/ml	（4號標準品）	100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
60 pg/ml	（3號標準品）	100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
30 pg/ml	（2號標準品）	100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
15 pg/ml	（1號標準品）	100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pg/ml	（空白對照）	原倍濃度不用稀釋直接加入50ul