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elisa試劑盒常用檢測(cè)方法您可知嗎?
間接法是檢測(cè)抗體常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：
(1)將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
(2)加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過(guò)程中被洗去。
(3)加酶標(biāo)抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體問(wèn)接地標(biāo)記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測(cè)人對(duì)某種疾病的抗體，可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。
(4)加底物顯色：顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。
本法只要更換不同的固相抗原，可以用種酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。
Elisa間接法、競(jìng)爭(zhēng)法、捕獲法，捕獲法測(cè)IgM抗體
血清中針對(duì)某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時(shí)存在，后者會(huì)干擾IgM抗體的測(cè)定。因此測(cè)定IgM抗體多用捕獲法，先將所有血清IgM(包括特異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再測(cè)定特異性IgM。操作步驟如下：
(1)將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。
(2)加入稀釋的血清標(biāo)本：保溫反應(yīng)后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分。
(3)加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結(jié)合。洗滌。
(4)加入針對(duì)特異性的酶標(biāo)抗體：使之與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)結(jié)合。洗滌。
(5)加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標(biāo)本中的特異性IgM抗體存在，是為陽(yáng)性反應(yīng)。
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