本生詳述胎牛血清使用中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題_技術(shù)文章

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本生詳述胎牛血清使用中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題
閱讀次數(shù)：15827 發(fā)布時(shí)間：2021/1/11 16:03:47

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　　本生詳述胎牛血清使用中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題

　　1、如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

　　將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

　　長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清，并避免反復(fù)凍融。

　　我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)個(gè)月。若次無(wú)法用完瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

　　2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

　　沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另個(gè)無(wú)菌瓶里(般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會(huì)自然消失。

　　3、實(shí)驗(yàn)室如何選擇適合的血清?

　　國(guó)內(nèi)致認(rèn)為HYCLONE的血清是好的，但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷，國(guó)外般認(rèn)為GIBCO比HYCLONE好，所以并不是價(jià)格決定質(zhì)量，但是總的來(lái)說(shuō)這兩種價(jià)格普遍偏貴，般不是太嬌氣的細(xì)胞，國(guó)產(chǎn)的就夠用了。

　　4、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

　　按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

　　(1)解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均，減少沉淀的發(fā)生。

　　(2) 血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均。

　　(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

　　(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

　　(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。

　　(6) 若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。

　　5、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?

　　來(lái)源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

　　組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng)，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

　　血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過(guò)個(gè)月。解凍血清時(shí) ，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會(huì)增加，血清在解凍和熱滅活后，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

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